ChIP-seq
ChIP-seq技術(shù)結(jié)合染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)與高通量測(cè)序,是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具,通常用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)或組蛋白特異性修飾位點(diǎn)的研究。
ChIP-seq技術(shù)是將ChIP與高通量二代測(cè)序結(jié)合,從基因組范圍內(nèi)檢測(cè)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA區(qū)段。研究轉(zhuǎn)錄因子及其他與染色質(zhì)相關(guān)的蛋白如何影響表觀調(diào)控,檢測(cè)在一些生物過(guò)程與疾病中,DNA與蛋白質(zhì)相互作用調(diào)控基因表達(dá)的重要性。結(jié)合生物信息學(xué)分析,能夠找到轉(zhuǎn)錄因子下游調(diào)控的靶基因,為進(jìn)一步闡明生物學(xué)機(jī)制提供依據(jù)。
技術(shù)優(yōu)勢(shì):
1. 全基因組覆蓋:ChIP-Seq可在全基因組范圍單堿基水平對(duì)蛋白結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行篩選與鑒定。
2. 高靈敏度:每個(gè)樣本可獲得數(shù)百萬(wàn)條的序列標(biāo)簽,可發(fā)現(xiàn)研究基因組上稀有的蛋白結(jié)合位點(diǎn)。
3. 高精確率:可獲得高水平的信噪比數(shù)據(jù),準(zhǔn)確區(qū)分真實(shí)事件與噪音,精確定位蛋白結(jié)合位點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)原理:
首先通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段,并對(duì)其進(jìn)行純化與文庫(kù)構(gòu)建;然后對(duì)富集得到的DNA片段進(jìn)行高通量測(cè)序。
應(yīng)用:(1)判斷DNA鏈的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾;
(2)檢測(cè)RNA polymerase II及其它反式因子在基因組上結(jié)合位點(diǎn)的精確定位;
(3)研究組蛋白共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系;
(4)CTCF轉(zhuǎn)錄因子研究。